Twist Bioscience’s Cloned Oligo Pools

オリゴプール とは、一本鎖の オリゴヌクレオチド (オリゴ)のコレクションまたはライブラリのことです。オリゴプールは、 CRISPR ライブラリー構築、遺伝子構築、ペプチド・蛋白質スクリーニング、ハイスループットなレポーターアッセイ、データ保存、FISH解析など多くの用途に使用されています。 クローン化オリゴプール は、ベクターにクローン化された二本鎖のオリゴです。

オリゴプールの品質は、実験の成功に極めて重要です。特に、オリゴプール合成時(図1b)やクローニング時(図1d)のエラーはオリゴプールの品質に影響を与え、不正確な配列につながる可能性があります。エラーを修正することは可能ですが(例えば、ターゲットヒットを検証するために、さらに下流の次世代シーケンス(NGS)を行うなど)、コストと時間がかかることがあります。エラーを最小限に抑え、ポリメラーゼ連鎖反応(Polymerase chain reaction、PCR)増幅条件をテストし、増幅に最も適したポリメラーゼとプライマーペアを選択し、クローニングワークフローを設計するという煩雑なステップを避けるために、ツイストバイオサイエンスは最適化したクローニングプロセスを開発しました1。このプロセスには、クローニング戦略の設計、シリコンプラットフォーム上での高度に均一で正確なオリゴプールの合成(図1b)、オリゴプールの増幅(図1c)およびクローニング(図1d)、そしてNGS検証(図1f)が含まれます。この最適化されたクローニングプロセスにより、ツイストバイオサイエンスは、合成したオリジナルオリゴプールの高い均一性(表1)と精度を維持した信頼性の高いクローニングと、プールの均一性とドロップアウトに関するNGS品質管理データを顧客に提供します。

1. 製品の仕様 (Twist Bioscience、20231).

Oligo lengthUp to 100 nt
YieldStarting at 50 µg
Uniformity>95% of target oligos represented
Turnaround time6-8 weeks for new vectors, and 4-6 weeks for onboarded vectors

1. Twist Bioscience社の最適化されたクローニングプロセスのワークフロー。クローン化されたオリゴプールがTwist Bioscienceによって作られるまでは(g)、お客様はTwist Bioscienceに目的のオリゴ配列を提供するだけでよく(a)、Twist Bioscienceはその他のステップ(b-f)を担当することになります。(a) お客様によるオリゴプールライブラリーの設計。(b) Twist Bioscienceによる、シリコンプラットフォーム上でのオリゴプールの合成、クローニング戦略の設計、および合成。なお、お客様独自のベクターが必要な場合は、ベクターエンジニアリングはTwist Bioscienceが行います。(c) オリゴプールの増幅 。(d) オリゴプールのクローニングにより、(e) クローニングされたオリゴプールを形成します。 (f) NGS検証および品質管理。(g) 高品質なクローンオリゴプールを受領後、お客様は直接実験を行うことができます。

1Twist Bioscience. January 2023. Cloned Oligo Pools. Twist Bioscience. https://www.twistbioscience.com/resources/product-sheet/twist-cloned-oligo-pools