拡散型低ダイバーシティ・ライブラリー拡散型低ダイバーシティ（Spread-out low diversity、SOLD）ライブラリーは、コンビナトリアル異変体ライブラリー（CVL）のひとつのサブタイプです。 More （Spread-out low diversity (SOLD) library）は、コンビナトリアル異変体ライブラリーコンビナトリアル異変体ライブラリー（Combinatorial variant library、CVL）は、タンパク質の特定のドメインにわたって同時に複数の位置で変異させたバリアントのコレクションです。 More（CVL）のひとつのサブタイプです。通常のCVLとは異なり、SOLDライブラリーは、バリアントドメインの制限なしに、 野生型自然集団で最も頻繁に見られる遺伝子と特性と表現型。 More 配列に散在する複数の位置で同時に変異生物のゲノムの核酸配列の変化。 Moreしたバリアントをコレクションすることができます。SOLDライブラリーは酵素進化プロジェクトのために設計され、特にタンパク質とその環境との関係を探るためにタンパク質配列をマッピングするために使用されます。これらは完全に合成デザインであり、テンプレートは必要ありません（Twist Bioscience、2023; Willems、2023）。CVLと同様に、TwistのSOLDライブラリーはプールされたオプション（全てのバリアントが一つのチューブに入った状態）、あるいは ベクター生物内で安定的に維持できる小さなDNA断片で、クローニングの目的で外来DNA断片を挿入することができます。 More にクローニングされた状態で納品されます（表1）。表1にTwist社のSSVLの仕様を示します。
表1. TwistのSOLDライブラリーの仕様（Twist Bioscience、2023）。
| 製品形式 | 直鎖二本鎖DNAまたはクローンDNA |
| 注文制限 | 本数制限なし |
| 収率 | 全バリアントを1本のチューブにプールします合計1μgまで/チューブ（長さによります） |
| 納期 | 4週間（プロジェクトによります） |
異変体ライブラリーを作製する従来の方法には、 ランダム変異誘発法DNA配列全体にランダムに変異を導入する技術。 More （エラーが起こりやすいPCR（error-prone PCR、epPCR）など）、組換え変異誘発法、 コンビナトリアル変異誘発法DNA配列内の複数の位置を同時に変異させる部位特異的手法であり、各変異体には複数の変異が含まれています。 More （NNK、TRIMなど）、 部位特異的変異誘発法二本鎖DNAやプラスミドのある領域、あるいは異なる領域内の特定の位置、あるいは連続したアミノ酸に変異を与える方法。 More などがありませんが、一般に、コドン使用量の制御が制限され、配列バイアスが存在し、所望のバリアントの生成が不完全であるなどの欠点や限界があります。その代わりに、Twistはシリコンベースの合成プラットフォームを使って高品質のオリゴプールを生成し、正確で完全にカスタマイズされたユーザー定義のSOLDライブラリーを構築します（Willems、2023）。
SOLDライブラリ合成ワークフロー
TwistのSOLDライブラリーは、96ウェルプレートと同じフットプリントを持つシリコンベースのプラットフォームで合成され、一度に100万個の オリゴヌクレオチドヌクレオチド数が少なく、短くて直鎖状のDNAまたはRNA More （オリゴ）配列を生成します（図1bの挿入突然変異の一種で、DNAセグメントに1つ以上のヌクレオチドが付加されます。 More部分）。このワークフローでは、シリコンベースの合成プラットフォームが オリゴプール一本鎖オリゴヌクレオチド（オリゴ）のコレクションまたはライブラリー。 More 、つまり一本鎖オリゴのコレクションを生成し（図1bの挿入部分と図1c）、SOLDライブラリーを構築するために使用されます（図1d）。その後、ライブラリーのバリアントはアセンブルされ、発現ベクターにクローン化され、微生物で増殖され、スクリーニングされ（図1e）、NGSによって配列決定され（図1f）、顧客に出荷されます（図1g）（Twist Bioscience、2023）。
図1. TwistのSOLDライブラリー合成のワークフロー。
SOLDライブラリーの品質
図2は、野生型配列全体の様々な選択された位置にバリアントを持つTwistのSOLDライブラリーのNGS QCレポートです。図2aでは、期待される結果（exp）とNGSで得られた結果（obs）の両方が示されています。その結果、TwistのSOLDライブラリーは、要求されたアミノ酸頻度（図2a）と密接に一致するアミノ酸分布を提供し、脱落のないバリアントの均一な分布（図2b）を示しました。
図2. Twistが作成したCVLのQCレポート。a) “exp “は期待される結果を表し、”obs “はNGSによって得られた結果を表します（Twist Bioscience、2023）。
参考文献
Twist Bioscience. (2023). Spread-out low diversity (SOLD) libraries. Twist Bioscience. https://www.twistbioscience.com/sites/default/files/resources/2021-03/ProductSheet_Libraries_SOLD_3MAR21_Rev2.pdf
Willems, B. (2023). Twist DNADNAは 「deoxyribonucleic acid」の略で（デオキシリボ核酸）、2本のポリヌクレオチド鎖からなるポリマーで、互いに巻きついて二重らせんを形成しています。 More variant libraries [PowerPoint slides]. Twist Bioscience.